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解析蛋白纯化仪操作保养小技巧
发布时间:2019-05-20   点击次数:34次
 蛋白质纯化仪的操作和保养:
第一步:开机
  1、检查仪器及电脑电源线连接是否正常;
  2、按电源开关,打开ÄKTA系统主机;
  3、打开电脑;
  4、观察仪器指示灯联机状态ok,打开unicorn软件进入操作界面;
  注意:
  ÄKTAavant仪器显示面板显示ready
  ÄKTApure仪器右侧面板上的白色指示灯长亮;
  ÄKTAexplorer、ÄKTApurifier仪器上的CU-950模块指示灯Power、PC、System三盏灯全部长亮。
  5、然后双击电脑桌面上的Unicorn图标。进入操作界面,准备实验;
  注意:
  强烈建议放置在冷库或层析柜等低温状态下的仪器一直处于开机状态,以防冷凝水产生造成短路损伤仪器。
第二步:清洗管路排除气泡
  1、将入口金属头从20%乙醇中取出,用ddH2O冲洗金属头,然后放入已处理好的超纯水中,在systemcontrol窗口工具栏中点manual—ExecuteManualInstructions—pumpAwash或pumpBwash,进行洗泵,泵洗程序会自动运行结束;
  注意:
  a.在ÄKTAexplorer/purifier类型仪器中请执行manual—pump—pumpAwash或pumpBwash进行洗泵;
  b.若buffer管路中存在大段空气亦可先通过手动方式排除气泡:以低流速1-2ml/min运行泵A或B,依次旋松对应的金属泵头上的黑色排气阀,连接注射器缓慢抽动溶液直至气泡完全排出;
  c.仪器默认管路为A1和B1,若需手动排出A2/B2管路中气泡必须预先切换至对应的管路
 

蛋白质纯化仪

  2、系统整体运行预检
  以超纯水为背景运行仪器,在bypass状态下检查UV基线在平稳时的绝对值是否偏高,系统压力是否偏高;
  注意:
  a.如若UV绝对值在1000mAU左右甚至超过1000mAU,说明紫外流路池污染严重,应使用1MNaOH和超纯水反复冲洗直至UV基线下降。
  b.如若系统在End状态下,压力显示值依然大于0Mpa,说明压力基线漂移。可进行零点校正重新调整压力基线。
  c.如若系统压力偏高,应检查在线滤膜是否需要清洗或更换。
  3、取出金属头,将其放入已处理好的缓冲液中,进行泵洗,泵洗程序会自动运行结束;
  注意:
  a进行分子筛实验时,选择pumpAwash;
  b进行其他方法时,按pumpBwash—pumpAwash顺序执行,因为系统默认是使用A相,醉终存在管路里的缓冲醉好是A相。
第三步:连接层析柱(湿接方法)
  1、设报警压:在systemcontrol窗口工具栏中点manual进入命令窗,点击alarms—alarmsystempressure,设置highalarm,点击insert。点击pump—flow—flowrate,输入流速1ml/min;点击insert,execute;
  注意:
  a.装柱之前必须先设定报警压;
  b.同填料或柱管,耐受压不同,其数值可在说明书中查询。压力报警的设定原则:取填料,柱管,仪器三者耐受压的醉低值;
  c.一般情况下仪器本身会标配一个反压阀(FR-902),当反压阀在线时仪器背景压会>0.2mpa,如果在柱子醉优流速下会超压,可将反压阀(FR-902,在电导池之后)切换至offline(avant或pure仪器)或者短接(ÄKTAexplorer/purifier仪器)。
  2、先将柱子上端堵头取下,将进样阀溶液出口端管路伸入上端柱头,用缓冲液将柱头填满,微拧紧;
  3、将下端堵头微拧松,将上端接头拧紧,再将下端堵头拧下,看到柱下端开始滴出液体时,将柱下端接到紫外流通池;
  注意:
  如有柱位阀,需在systemcontrol窗口选择manual—columnposition选择对应的柱位。
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